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內(nèi)源性內(nèi)參,你應(yīng)該了解更多

內(nèi)參,即是在檢測細(xì)胞內(nèi)分子表達(dá)變化時選擇的參照物,其在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)相對恒定,在處理因素作用條件下不會發(fā)生表達(dá)改變的基因。

2022-01-20

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“你們的內(nèi)參加入提取嗎?”

“你說監(jiān)控采樣和提取,怎么做到的?”

“這個內(nèi)參檢測的是什么基因呀?”

……

自從伯杰帶有內(nèi)參的新冠檢測試劑上市,關(guān)于內(nèi)參的問題紛至沓來。那就讓我們一起來看一看內(nèi)參為何方神圣吧!


1

---什么是內(nèi)參?


內(nèi)參,即是在檢測細(xì)胞內(nèi)分子表達(dá)變化時選擇的參照物,其在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)相對恒定,在處理因素作用條件下不會發(fā)生表達(dá)改變的基因。內(nèi)參同樣可以校正上樣量、上樣過程中存在的實驗誤差,保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
2

---什么是內(nèi)源性內(nèi)參?


內(nèi)源性參照基因,也就是管家基因(持家基因,house keeping gene)。

管家基因是一類始終保持著低水平的甲基化并且一直處于活性轉(zhuǎn)錄狀態(tài)的基因,高度保守并且在大多數(shù)情況下持續(xù)表達(dá)。其表達(dá)水平受環(huán)境因素影響較小,而且是在個體各個生長階段的大多數(shù),或幾乎全部組織中持續(xù)表達(dá),或變化很小,因此常存在于生物細(xì)胞核的常染色質(zhì)中。它的表達(dá)只受啟動序列或啟動子與RNA聚合酶相互作用的影響,而不受其他機(jī)制調(diào)節(jié)。

管家基因維持細(xì)胞最低限度功能所不可少的基因, 如編碼組蛋白基因、編碼核糖體蛋白基因、線粒體蛋白基因、糖酵解酶的基因等。這類基因在所有類型的細(xì)胞中都進(jìn)行表達(dá),因為這些基因的產(chǎn)物對于維持細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)和代謝功能是必不可少的。

3

---伯杰新冠檢測試劑中的RNase P內(nèi)參是什么?


RNase P,即為核糖核酸酶P,是由一條長鏈非編碼RNA和十個蛋白質(zhì)亞基組成的核糖核蛋白質(zhì)復(fù)合物,可作用于催化切割RNA。核糖核酸酶是人體內(nèi)最重要的核酶之一,也是第一個被發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)以外具有催化活性的生物大分子。
RNase P 作為人體的生理作用可以充分表現(xiàn)有機(jī)體的生命活動內(nèi)部化學(xué)反應(yīng)的有序性,核糖核蛋白復(fù)合體可以根據(jù)靶RNA設(shè)計的外部引導(dǎo)序列(EGS)能與靶RNA堿基互補(bǔ)結(jié)合,形成類似前體tRNA的二級結(jié)構(gòu),從而引導(dǎo)人類核糖核酸酶P對靶RNA進(jìn)行特異切割。
4

---RNase P做內(nèi)參有何優(yōu)勢


由于RNase P在人體各器官組織細(xì)胞中普遍存在,而且能夠?qū)?/span>人體來源樣本的RNA核酸片段進(jìn)行檢測,同時也可以作為內(nèi)標(biāo)結(jié)合使用,并監(jiān)測整個實驗操作過程的準(zhǔn)確性。
若熒光PCR平臺所顯示出的樣本反應(yīng)曲線和內(nèi)標(biāo)反應(yīng)曲線均不起跳,則說明采集到的樣本質(zhì)量有可能出現(xiàn)問題(如咽拭子未刮到上皮細(xì)胞,采樣失?。?/span>或因為實驗操作不當(dāng)(如保存、運(yùn)輸不當(dāng),核酸提取過程RNA降解等)而出現(xiàn)假陰性,這需要引起操作者的注意。而RNase P內(nèi)參可以對樣本的采集、運(yùn)輸儲存、核酸提取等步驟起到監(jiān)控的作用,保障了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

現(xiàn)在,你是否更了解內(nèi)源性內(nèi)參了呢?

不同于外源性內(nèi)參需要在提取時額外加入,并僅能監(jiān)控提取過程;內(nèi)源性內(nèi)參無需額外加入,我們設(shè)計了擴(kuò)增RNase P的引物探針,只要采樣、提取過程無問題,即可在ROX通道看到內(nèi)參的擴(kuò)增曲線。

是不是既簡便、又巧妙的設(shè)計呢?



伯杰醫(yī)療

上海伯杰醫(yī)療科技有限公司是一家致力于感染性病原體分子診斷試劑研發(fā)和應(yīng)用,深耕于多重?zé)晒?PCR 診斷試劑和痕量病毒二代測序試劑及相關(guān)服務(wù)的高新技術(shù)企業(yè)。公司圍繞感染性病原體這一主線,從診斷試劑、診斷儀器、測序服務(wù)和醫(yī)檢所服務(wù)等多個面提供全套解決方案。公司秉承“勇于創(chuàng)新,質(zhì)量為先”的方針,為醫(yī)療機(jī)構(gòu)、疾控公衛(wèi)、高??蒲械群献骰锇樘峁﹥?yōu)質(zhì)產(chǎn)品與服務(wù)。

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